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病理科常规染色

2024-06-30 12:42病理科

苏术素-伊红染色简称(HE 染色)。HE染色能较好显示组织结构和细胞形态,主要用于观察和描述正常和病变组织的形态特征,是医学领域中广泛应用的染色方法,也是病理检验中最常用的基本染色方法。习惯上称苏木素-伊红染色为常规染色。

苏木素(haematoxylin)又称苏木精是从苏木素树心中提炼出来的一种天然碱性染料,为淡黄色粉末,易溶于乙醇,也可溶于热水。是最常使用的细胞核染料。

伊红 Y(eosin)又称曙红 Y,简称伊红,是酸性染料,化学名称为四溴荧光素二钠盐。伊红分水溶性和醇溶性两种,常规染色中多用水溶性伊红。

首先是苏木素染色的基本原理我们习惯上称苏术素为碱性染料,实际上,苏木素本身并没有着色的能力。苏木素染色时,必须首先经过氧化,成为酸性苏木红,又称氧化苏木素。苏木红分子才含有发色团(醌苯环)和助色团(羟基),因而具有染色的作用。苏木素经过氧化转变成苏木的过程叫做“成熟”。

苏木红对组织无亲和力,要使组织着色,需要媒染剂的参用的媒染剂为硫酸铝钾,当苏木红与媒染剂中的铝结合,即形成带正电荷、呈碱性的蓝色色精。细胞核主要由脱氧核糖核酸(DNA)组成,在DNA 双螺旋结构中,两条核酸链上的磷酸基向外,使 DNA 双螺旋的外侧带有负电荷呈酸性。带有负电荷、呈酸性的 DNA,很容易与带正电荷、呈碱性的蓝色苏红色精结合而被染色。苏木素在碱性溶液中成蓝色,所以细胞核被染成蓝色。

其次是伊红染色的基本原理伊红是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋质的氨基正电荷相结合而使细胞胞质染色。细胞胞质的主要成分是蛋白质,它是两性化合物pH 位于其等电点PH 4.7~5.0时,对外不显电性,此时酸性或碱性染料均不易使之着色。当pH调到6.7~6.8,大于胞质中蛋白质的等电点的pH时,胞质蛋白质表现为酸式电离,而有负电荷,此时可被带正电荷的染料染色。同时由于胞核也带有负电荷亦被带正电荷的染料染色,如果胞核和胞质被同一染料染色,就会造成胞核和胞质不易区分,不利于镜下观察。当把 pH调到蛋白质等电点以下时,在伊红Y染液中加人醋酸,使胞质中蛋白质星碱性电离带正电荷(阳离子),就可被带有负电荷的染料着色。通常情况下细胞质、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被伊红染成红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。所以伊红是细胞质的良好染料。

最后HE染色的结果是,细胞核、软骨、钙盐、黏液和各种微生物被染成蓝色、深蓝色或灰蓝色。

细胞质呈淡红色,胶原纤维呈淡粉红色,细胞质内嗜酸性颗粒呈鲜红色,红细胞呈橘红色。

一张质量优良的 HE 染色切片应该是组织结构清晰、核与质蓝红相映,核膜及核染色质颗粒清晰可见,组织或细胞的一般形态及很多物质成分均能显示出来,且能长期保存,不易退色。